زیست شناسی مولکولی کاربردی

زیست شناسی مولکولی کاربردی

طراحی و ساخت سازۀ نوترکیب ژن E2 ویروس هپاتیت C ژنوتیپ a1 برای مطالعات بعدی واکسن

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان
1 استادیار،گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه لرستان، خرم آباد، ایران
2 دانشیار، مرکز تحقیقات هپاتیت، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی لرستان،خرم آباد، ایران
چکیده
ویروس هپاتیت C گسترش جهانی داشته و از علل اصلی ابتلا به سیروز کبدی و از مهمترین دلایل مرگ‌و میر در سرتاسر جهان است. در حال حاضر واکسن مناسبی برای پیشگیری از ابتلا به این ویروس وجود ندارد. گلیگوپروتئین E2 یکی از این پروتئین‌ها است که عامل اصلی در اتصال و ورود به سلول میزبان است. هدف اصلی این مطالعه ساخت سازه بیانی از ژن E2 ویروس هپاتیت C در میزبان باکتریایی بود. به منظور انجام این مطالعه ژن گلیکوپروتئین E2 از سروتیپ a1 از بیماران جداسازی و شناسایی شد. با استفاده از RT-PCR ژن جداسازی شد و در ادامه با استفاده از Nested-PCR تکثیر شد. سازه بیانی ژن در وکتور pET21α ساخته شد و به درون باکتری‌های مستعد (DH5-α) E.coli، انتقال داده و کلنی‌های حاوی وکتور مدنظر را براساس مقاومت به آمپی‌سیلین و با استفاده از روش Colony PCR انتخاب شد. به منظور آنالیز نهایی و تایید کلونینگ ژن E2 قطعات کلون شده تعیین توالی شد و نتایج تعیین توالی، در پایگاه NCBI بلست شد. نتایج بدست آمده از این مطالعه نشان دهنده صحت مراحل انجام آزمایش و کلون شدن دومین حفاظت شده ژن E2 در وکتور pET21α و بیان این ژن در باکتری E.coli DH5αبود. با توجه به نقش گلیکوپروتئین E2 در اتصال و ورود به سلول و همچنین توان تحریک سیستم ایمنی همورال و سلولی توسط آن، E2 کاندید مناسبی برای مطالعه برای تهیه واکسن است. سازه نوترکیب این مطالعه برای بررسی بیشتر و بررسی ساختار پروتئین و ایمنی‌زایی باید در مراحل بعدی مورد مطالعه قرار بگیرد.
کلیدواژه‌ها